首个！！覆盖洋葱伯克霍尔德复合群（23个物种）的核酸鉴定试剂盒面世

DM-BCC Quester™洋葱伯克霍尔德复合群

（23个物种）荧光定量检测试剂盒

背景

不可接受微生物——洋葱伯克霍尔德菌复合群（B.cepacia complex, BCC）对特定的人群具有条件致病能力，它们可通过气溶胶颗粒、患者与感染者的直接物理接触或与污染表面的接触而发生传播，感染特定的人群包括囊性纤维肿（CF）患者、长期住院免疫力低下人群，引起包括菌血症、尿路感染、感染性关节炎、腹膜炎和某些基础疾病患者的肺炎等症状。对1998-2006的FDA的召回数据统计分析发现，22%的非无菌产品的召回是由洋葱伯克霍尔德菌复合体污染导致，在2004年-2011年，这一比例上升到34%。

BCC在非无菌药品中因微生物污染发生召回的事件中排名第一，这是由于其终端控制具有挑战性。BCC来源广泛（植物性的原辅料、水系统、土壤等），对常用的防腐剂（包括氯己定葡萄糖酸盐（CHX）、氯化十六烷基吡啶、三氯生、苯扎氯铵（BZK）和聚维酮）具有耐受性，甚至能利用其作为碳源而增殖。2021年11月国家药品监督管理局药品审评中心发布的《化学药品创新药上市申请前会议药学共性问题相关技术要求》明确要求“对于吸入、口服、黏膜、皮肤和鼻腔给药的水溶液非无菌制剂，一般应参照相关技术要求对洋葱伯克霍尔德菌进行研究，并制定相应的控制策略”。

为了实现对BCC过程控制和终端检测，需要专门的方法。BCC的生长速度相对较慢，容易被快速生长的其他菌群所掩盖，所以传统的培养方法难以筛查到。为了从产品中分离BCC，USP42 <60> “非无菌产品的微生物检验-洋葱伯克霍尔德复合群测试”提供了BCSA 选择性培养基的方法。该方法改变了之前Bcc无从检测的状态，促进了BCC的终端控制，但是仍然具有周期较长，过程管控应用受到限制，且存在出现一定的假阳性的机率（如Flavobacterium spp., Ralstonia spp.,Burkholderia gladioli 等可以在BCSA 选择性培养基上生长），不能直接确证。

具有更高灵敏度、稳定性、快捷的分子方法在临床、食品等领域已经被广泛应用，具有作为药品微生物检测替代方法的潜力。分子方法应用于Bcc检测的困难在于，Bcc不是单个物种，而是包含了23个物种的复合群，遗传多样性高，确定一个通用的靶标具有挑战性。微数自主研发大规模的泛基因组数据分析技术，将23个BCC目标物种的基因组打碎成重叠片段群，使用非目标基因组作为对照，获得了覆盖Bcc 复合群全体的共有、排他性保守片段，并以此片段为靶点开发了核酸鉴定试剂盒DM-BCC Quester,这也是首个可以实现对23个BCC目标物种进行核酸快检的试剂盒。

技术原理

DM-BCC Quester™技术原理：对直接的液体样品、增菌后的菌液以及选择性培养后的菌落，提取DNA后，通过特异性引物和TaqMan探针进行特异性检测。TaqMan探针是一段和目标序列特异性结合的核苷酸序列，它的5‘端连接有一个荧光报告基团，3’端连接有一个猝灭基团。当探针完整时，荧光基团和猝灭基团距离很近，荧光基因所产生的荧光信号汇报猝灭基团屏蔽。一旦探针发生水解，荧光基团就会和猝灭基团分离，那么荧光基团所产生的荧光就能被仪器所检测到，检测放大的荧光信号被用来识别目标是否存在。

检测流程

注：增菌后的菌液（路线①）、直接的液体样品（路线②）、以及选择性培养后的菌落（路线③）均可作为检测对象，不同的样品涉及的前置步骤有差异导致周期不同。直接液体样品和菌落，周期在2-3h，如果需要增菌，需要额外的6h。

应用范围

水系统、非无菌产品终产品及生产过程的BCC定性检测。

USP 42 <60>选择性培养基培养后可疑菌落的鉴别实验。

产品优势

覆盖BCC 23个物种，而非仅仅针对洋葱伯克霍尔德单个物种；检测限低至5拷贝/反应；
高诊断灵敏度（99.82%）和特异性（100%），高置信水平（经过1000多个阳性菌株（inclusively）及6万多个非目标基因组（exclusively）计算机模拟PCR验证，克服小样本量数据置信度低的缺点）；
根据《9201 药品微生物检验替代方法验证指导原则》《9204 微生物鉴定指导原则》进行了湿实验验证，使用含USP药典要求的Burkholderia cepacia、Burkholderia cenocepacia和Burkholderia multivorans等标准菌株及环境菌株，灵敏度和特异性均为100%；
内置in silico 设计的无交叉反应Spike-in 对照和阳性对照，为检测结果提供更可靠的质量控制；
周期短，检测最短仅需2-3小时即可获得结果（低浓度样本可能需要额外的6小时增菌步骤）；
操作简单，重复性好。

参考资料

📎60 MICROBIOLOGICAL EXAMINATION OF NONSTERILE PRODUCTS—TESTS FOR BURKHOLDERIA CEPACIA COMPLEX.pdf

关于我们

杭州微数生物科技有限公司（Hangzhou Digital-Micro）是一家专注于微生物基因组学研究和转化的科技型企业。公司研发团队博士和硕士学历占总人员90%以上，30%有海外留学经历，团队有近20年微生物鉴定、分析和CRISPR快速检测研发的学术背景，微生物基因鉴定方法获CNAS认可。秉承“数据驱动产业”的理念，为客户提供专业的微生物基因数据解读方案和微生物基因检测产品，引领微生物组学进入产学研结合的多源异构大数据时代。